Genetic diversity of Trypanosoma cruzi strains isolated from chronic chagasic patients and non-human hosts in the state of São Paulo, Brazil

BACKGROUND Trypanosoma cruzi shows an exuberant genetic diversity. Currently, seven phylogenetic lineages, called discrete typing units (DTUs), are recognised: TcI-TcVI and Tcbat. Despite advances in studies on T. cruzi and its populations, there is no consensus regarding its heterogeneity. OBJECTIVES This study aimed to perform molecular characterisation of T. cruzi strains, isolated in the state of São Paulo, to identify the DTUs involved and evaluate their genetic diversity. METHODS T. cruzi strains were isolated from biological samples of chronic chagasic patients, marsupials and triatomines through culture techniques and subjected to molecular characterisation using the fluorescent fragment length barcoding (FFLB) technique. Subsequently, the results were correlated with complementary information to enable better discrimination between the identified DTUs. FINDINGS It was possible to identify TcI in two humans and two triatomines; TcII/VI in 19 humans, two marsupials and one triatomine; and TcIII in one human host, an individual that also presented a result for TcI, which indicated the possibility of a mixed infection. Regarding the strains characterised by the TcII/VI profile, the correlation with complementary information allowed to suggest that, in general, these parasite populations indeed correspond to the TcII genotype. MAIN CONCLUSIONS The TcII/VI profile, associated with domestic cycles and patients with chronic Chagas disease, was the most prevalent among the identified DTUs. Furthermore, the correlation of the study results with complementary information made it possible to suggest that TcII is the predominant lineage of this work.

The path of canine visceral leishmaniasis versus the path of Center for Zoonoses Control: contributions of spatial analysis to health / O caminho da leishmaniose visceral canina versus o caminho do Centro de Controle de Zoonoses: contribuições da análise espacial para a saúde / La trayectoria de la leishmaniasis visceral canina versus la trayectoria del Centro para el Control de Zoonoses: contribuciones del análisis espacial a la salud

Visceral leishmaniasis (VL) is a public health problem in Brazilian municipalities. As much as there is a planning of public policies regards VL in São Paulo State, new cases have been reported and spread. This paper aims to discuss how the Center for Zoonoses Control conducts its actions spatially in endemic city of Presidente Prudente, São Paulo State. Data are from the Municipal Health Department of Presidente Prudente, Adolfo Lutz Institute, and Brazilian Institute of Geography and Statistics. We spatially estimated the dog population per census tract and used geoprocessing tools to perform choropleth maps, spatial trends, and spatial autocorrelation. We found a spatial pattern of higher prevalence in the city's outskirt and a positive statistically significant spatial autocorrelation (I = 0.2, p-value < 0.000) with clusters of high-high relationships in the Northwest part of the city. Moreover, we identified a different direction in the path of the conducted serosurveys versus the canine VL trend, which stresses the fragility of the Center for Zoonoses Control actions to control the disease. The Center for Zoonoses Control always seems to chase the disease. The spatial analysis may be useful for rethinking how the service works and helps in public policies.

A leishmaniose visceral (LV) é um problema de saúde pública nas cidades brasileiras. Por mais que haja um planejamento de políticas públicas para LV no Estado de São Paulo, Brasil, novos casos têm sido notificados e se disseminado. O artigo objetiva discutir como o Centro de Controle de Zoonoses realiza suas atividades espacialmente em uma cidade endêmica, Presidente Prudente, no Estado de São Paulo. Os dados são da Secretaria Municipal de Saúde de Presidente Prudente, Instituto Adolfo Lutz e Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística. Estimamos espacialmente a população canina por setor censitário e utilizamos ferramentas de geoprocessamento para produzir mapas coropléticos, tendências espaciais e autocorrelação espacial. Encontramos um padrão espacial de maior prevalência na periferia da cidade e uma autocorrelação espacial positiva estatisticamente significativa (I = 0,2; p < 0,000) com clusters de relação alta-alta no noroeste da cidade. Além disso, identificamos uma direção diferente no caminho dos inquéritos sorológicos realizados versus a tendência na LV canina, o que enfatiza a fragilidade das medidas de controle do Centro de Controle de Zoonoses para controlar casos da doença. O Centro de Controle de Zoonoses parece estar sempre correndo atrás da doença. A análise espacial pode ser útil para repensar o funcionamento do serviço e auxiliar as políticas públicas.

La leishmaniasis visceral (LV) es un problema de salud pública en las ciudades brasileñas. Aunque hay políticas públicas de planificación relacionadas con la LV en el estado de São Paulo, Brasil, se han informado de nuevos casos, además de su propagación. El objetivo de este trabajo es discutir cómo el Centro de Control de Zoonosis dirige sus acciones espacialmente en una ciudad endémica del estado de São Paulo, Presidente Prudente. Los datos proceden de la Secretaría Municipal de Salud de Presidente Prudente, del Instituto Adolfo Lutz, y del Instituto Brasileño de Geografía y Estadística. Estimamos espacialmente la población de perros por sector censal y utilizamos herramientas de geoprocesamiento para elaborar mapas de coropletas, tendencias espaciales, y autocorrelación espacial. Encontramos un patrón espacial de más alta prevalencia en la periferia de la ciudad, además de una autocorrelación espacial positiva y estadísticamente significativa (I = 0,2; valor de p < 0,000) con clústeres de relaciones alto-alto en la parte noroccidental de la ciudad. Además, identificamos una dirección diferente en la trayectoria de las encuestas serológicas llevadas a cabo, frente a la tendencia de LV canina, que enfatiza la debilidad de acciones del Centro de Control de Zoonosis para controlar casos de la enfermedad. El Centro de Control de Zoonosis parece siempre estar tras la enfermedad. El análisis espacial podría ser útil para repensar cómo está funcionando el servicio, además de ayudar a políticas públicas.

Valores normais da atividade da colinesterase plasmática em anseriformes, com destaque para Alopochen aegyptiacus / Normal values of plasma cholinesterase activity in anseriformes, with emphasis on Alopochen aegyptiacus

A inibição da enzima colinesterase plasmática (BChE) pode ser utilizada como biomarcador para os efeitos da intoxicação por organofosforados e carbamatos. Nas aves, esta inibição ocorre de forma mais acentuada que nos mamíferos, porém poucos são os trabalhos publicados nestas espécies. O objetivo do estudo fo a dosagem da BChE em gansos-egípcios (Alopochen aegyptiacus) e nos anseriformes domésticos: gansos-domésticos (Anser anser domesticus) e marrecos (Anas platyrhynchos domesticus), para o estabelecimento de valores de referência normais. O trabalho possui ineditismo com relação à determinação desta enzima nos gansos-egípcios e domésticos. Os gansos e marrecos são mantidos em confinamento com fornecimento de alimentos e água ad libitum e em espaço adequado à sua manutenção no Instituto Adolfo Lutz (IAL), com a finalidade de fornecimento de sangue para a alimentação de triatomídeos do insetário de criação no Núcleo de Parasitoses Sistêmicas. Nos Alopochen aegyptiacus a média e o desvio padrão da BChE foram de 1.868 + 263,6 U/L, nos Anser anser domesticus 2.311 + 673,2 U/L e nos Anas platyrhynchos domesticus 4.290 + 86,11 U/L. (AU)

The inhibition of the plasma cholinesterase enzyme (BChE) can be used as a biomarker for the effects of intoxication by organophosphates and carbamates. In birds, this inhibition is more pronounced than in mammals, however there are few specific studies were conducted in this field. The aim of this study was to measure BChE in Egyptian geese (Alopochen aegyptiacus) and domestic anseriforms: domestic geese (Anser anser domesticus) and mallards (Anas platyrhynchos domesticus), not exposed to pesticides, for the establishment of normal values. The work is unprecedented regarding the determination of this enzyme in egyptian geese and domestic geese. Geese and mallards are kept in confinement with ad liditum food and water supply and in adequate space for their maintenance at the Adolfo Lutz Institute (IAL), for the purpose of supplying blood for the feeding of triatomines from the insectary of the Nucleus of Systemic Parasitoses. In Alopochen aegyptiacus the mean and standard deviation of BChE were 1,868 + 263,6 U/L, in Anser anser domesticus 2,311 + 673,2 U/L and in Anas platyrhynchos domesticus 4,290 + 86.11 U/L. (AU)

Preservação de ovos de helmintos e cistos de protozoários em iodo­mercurato de potássio. Revisitando experimentos realizados há cerca de 40 anos / Preservation of helminth eggs and protozoan cysts in potassium iodine­mercurate. Revisiting experiments carried out about 40 years ago

Foi realizada reavaliação sobre o estado de preservação de ovos de helmintos e cistos de protozoários mantidos por cerca de 40 anos em solução de iodo­mercurato de potássio a 0,2%. Foi observado que ovos de Schistosoma mansoni, Ancylostomidae e Trichuris trichiura e oocistos de Isospora belli mantiveram­se em condições adequadas para a sua identificação ao microscópio ótico comum. No material examinado, foi possível verificar a presença de miracídio em ovo de Schistosoma mansoni, forma larvada em ovo de T. trichiura e esporozoitos em oocistos de I. belli. (AU)

A reassessment was carried out on the preservation status of helminth eggs and protozoan cysts maintained for about 40 years in 0.2% potassium iodine­mercurate solution. It was observed that Schistosoma mansoni, Ancylostomidae and Trichiuris trichiura eggs and Isospora belli oocysts were kept in conditions suitable for their identification under a common light microscope. In the examined material, it was possible to verify the presence of miracidium in S. mansoni egg, larvae in T. trichiuraegg and sporozoites in I. belli oocysts. (AU)

Preservação de ovos de helmintos e cistos de protozoários em iodo-mercurato de potássio. Revisitando experimentos realizados há cerca de 40 anos / Preservation of helminth eggs and protozoan cysts in potassium iodine-mercurate. Revisiting experiments carried out about 40 years ago

Foi realizada reavaliação sobre o estado de preservação de ovos de helmintos e cistos de protozoários mantidos por cerca de 40 anos em solução de iodo‑mercurato de potássio a 0,2%. Foi observado que ovos de Schistosoma mansoni, Ancylostomidae e Trichuris trichiura e oocistos de Isospora belli mantiveram‑se em condições adequadas para a sua identificação ao microscópio ótico comum. No material examinado, foi possível verificar a presença de miracídio em ovo de Schistosoma mansoni, forma larvada em ovo de T. trichiura e esporozoitos em oocistos de I. belli.

A reassessment was carried out on the preservation status of helminth eggs and protozoan cysts maintained for about 40 years in 0.2% potassium iodine‑mercurate solution. It was observed that Schistosoma mansoni, Ancylostomidae and Trichiuris trichiura eggs and Isospora belli oocysts were kept in conditions suitable for their identification under a common light microscope. In the examined material, it was possible to verify the presence of miracidium in S. mansoni egg, larvae in T. trichiura egg and sporozoites in I. belli oocysts.

Controle da leishmaniose visceral canina por eutanásia: estimativa de efeito baseado em inquérito e modelagem matemática / Control of canine visceral leishmaniasis by euthanasia: estimated effect based on a survey and mathematical modeling / Control de la leishmaniasis visceral canina por eutanasia: estimación del efecto basado en una encuesta y modelo matemático

A leishmaniose visceral é uma doença emergente e negligenciada em processo de expansão para áreas urbanas. A incidência da doença humana está relacionada com a infecção canina. Araçatuba e Birigui são municípios do Estado de São Paulo, Brasil, com soroprevalência da infecção canina de 8 a 10%, que empregam estratégias de controle voltadas ao reservatório canino baseado em inquérito sorológico e eutanásia dos cães soropositivos. Usando dados desses programas de controle para parametrizar modelos matemáticos, este estudo avaliou a eficácia dessas atividades. Estimamos que o controle atualmente empregado é capaz de reduzir em cerca de 20% a incidência de casos de leishmaniose visceral canina (LVC). Considerando-se um controle contínuo e um esforço das atividades de inquérito sorológico igual ao triplo da média do observado em Araçatuba e Birigui, a atividade de eutanásia de cães com diagnóstico positivo seria efetiva para o controle da infecção canina. Embora teoricamente possível, na prática, o controle da LVC com as estratégias preconizadas atualmente é insuficiente, pois exigiria superpor dificuldades enfrentadas por estas atividades como falta de recursos materiais, humanos e financeiros, além das questões éticas e jurídicas associadas.

Visceral leishmaniasis is an emerging and neglected disease that is currently expanding to urban areas. The incidence of human disease is related to canine infection. Araçatuba and Birigui are municipalities (counties) in the state of São Paulo, Brazil, with 8-10% seroprevalence of canine infection and that employ control strategies targeting the canine reservoir, based on serological survey and culling of seropositive dogs. Using data from these control programs to parameterize mathematical models, this study assessed the efficacy of these activities. We estimated that current control is capable of reducing the incidence of canine visceral leishmaniasis (CVL) by approximately 20%. Assuming continuous control and three times the current serological survey activities in Araçatuba and Birigui, culling dogs with a positive CVL diagnosis would be effective for the control of canine infection. Although theoretically possible, in practice the control of CVL with the currently recommended strategies is insufficient, since it would require overcoming the difficulties in these activities, such as lack of material, human, and financial resources, besides associated ethical and legal issues.

La leishmaniasis visceral es una enfermedad emergente y pasada por alto en proceso de expansión hacia áreas urbanas. La incidencia de la enfermedad humana está relacionada con la infección canina. Araçatuba y Birigui son municipios del estado de São Paulo, Brasil, con una seroprevalencia de infección canina de un 8 a un 10% que emplean estrategias de control dirigidas al reservorio canino, basado en una encuesta serológica y eutanasia de los perros seropositivos. Usando datos de esos programas de control para proporcionar parámetros en modelos matemáticos, este estudio evaluó la eficacia de esas actividades. Estimamos que el control actualmente empleado es capaz de reducir cerca de un 20% la incidencia de casos de leishmaniasis visceral canina (LVC). Si se considera un control continuo y un esfuerzo de las actividades de encuesta serológica igual al triple de la media de lo observado en Araçatuba y Birigui, la actividad de eutanasia de perros con diagnóstico positivo sería efectiva para el control de la infección canina. A pesar de que teóricamente es posible, en la práctica el control de la LVC con las estrategias preconizadas actualmente es insuficiente, puesto que exigiría superar dificultades a las que se enfrentan estas actividades como la falta de recursos materiales, humanos y financieros, además de las cuestiones éticas y jurídicas asociadas.

Avaliação da efetividade do uso de coleiras impregnadas com deltametrina no controle da leishmaniose visceral no município de Votuporanga, Estado de São Paulo, Brasil, 2014 ­ 2016 / Evaluation of the effectiveness of using deltamethrinimpregnated collars to control visceral leishmaniasis in the municipality of Votuporanga, State of São Paulo, Brazil, 2014 ­ 2016

O objetivo deste artigo é apresentar os principais resultados do Projeto de Inovação Tecnológica em Saúde realizado entre 2014 e 2015, destacando-se o uso de coleiras impregnadas com deltametrina a 4% em cães em uma região endêmica para leishmaniose visceral (LV), o município de Votuporanga, São Paulo, Brasil. Neste município, anterior à realização do projeto, eram registrados muitos casos caninos e humanos da doença, com elevada taxa de letalidade. Durante o projeto, foram monitorados cerca de 16,5 mil cães, examinadas 25.700 amostras de sangue, considerando-se as perdas e as entradas de novos animais durante os quatro inquéritos sorológicos. Após sua finalização, verificou-se uma diminuição da prevalência e incidência de LV canina, assim como do número de casos humanos. A diminuição dos casos caninos foi correlacionada positivamente aos casos humanos no período de 2011 a 2016 (Correlação de Pearson de 0.914, p-valor<0.05). Além disso, a análise espacial dos resultados corrobora a diminuição ou desaparecimento da concentração de casos caninos e, consequentemente, de fontes e de infecção nas áreas endêmicas à medida que avançaram no tempo e espaço as diferentes etapas de desenvolvimento do projeto. Apesar da drástica redução na incidência da LV canina, ainda permaneceram algumas áreas críticas. Os resultados delineados sugerem a revisão de protocolos e manuais demonstrando a efetividade do uso das coleiras como medida preventiva e potencial no controle da LV. (AU)

This paper aims to present the main results of the Health Technology Innovation Project carried out between 2014 and 2015, which evaluates the use of 4% deltamethrin-impregnated collars in dogs, in an endemic region for visceral leishmaniasis (VL), the municipality of Votuporanga, São Paulo, Brazil. Before this project, Votuporanga had notified canine and human cases of the disease, with a high case fatality rate. We monitored approximately 16.5 thousand dogs, 25,700 blood samples analyzed, considering losses and entrances of new animals during the four serological surveys. After the project, the prevalence and incidence of canine VL decreased as well as the number of human cases. We found a positive correlation between the decrease of infected dogs and human cases from 2011 to 2016 (Pearson correlation of 0.914, p-value <0.05). Furthermore, the spatial analysis of the results indicated areas with canine cases concentration that decreased its intensity or disappeared concomitantly to the project levels in the space-time. Despite the drastic reduction in the incidence of canine VL, some critical areas remain. The current results suggest the review of protocols and manuals demonstrating the effectiveness of the use of collars as a preventive measure and potential in the control of VL. (AU)

Análise comparativa entre os diferentes protocolos utilizados para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina / Comparative analysis among the different protocols used for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis

Foi realizada análise comparativa entre os diferentes protocolos utilizados no diagnóstico da leishmaniose visceral canina, em inquéritos soroepidemiológicos, na região de São José do Rio Preto, no período de 2008 a 2012. Para cada protocolo avaliou-se o total de exames processados, o tempo médio para examinar as amostras coletadas nos diferentes períodos e a análise de concordância bruta. Foram utilizados quatro protocolos: diagnóstico apenas pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) em 12.871 (28,4%) cães, por ensaio imunoenzimático (EIE) e RIFI em 632 (1,4%); 22.387 (49,4%) por EIE/RIFI, e 9.453 (20,8%) pelo teste rápido (TR) Dual Path Platform (DPP®)/EIE. Nos dois primeiros grupos, as análises foram no eluato de sangue coletado em papel de filtro, e nos dois últimos no soro sanguíneo. O protocolo TR-DPP®/EIE demandou menor tempo (dias) desde a execução até a liberação dos resultados, em comparação aos demais. Na avaliação das taxas de concordância bruta, o TR-PP®/EIE apresentou melhor desempenho (58,5%). Apesar de, o atual protocolo TR-DPP®/EIE tenha contribuído para diminuir a discordância entre os resultados obtidos nos EIE/RIFI, o EIE confirma menos de 60% dos TR-DPP® reagentes, o que indica a necessidade de buscar novas alternativas para efetuar o diagnóstico em cães.

The comparative analysis was performed among the different protocols proposed for diagnosing the canine visceral leishmaniasis in the seroepidemiological surveys performed in the region of São José do Rio Preto, from 2008 to 2012. Each protocol evaluated the total number of processed tests, the mean time for examining the collected samples, in different periods, and the gross agreement analysis. Four protocols were used: diagnosis only by indirect immunofluorescence test (IFT), in 12,871 (28.4%) dogs samples; by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and IFT in 632 (1.4%); (ELISA/IFT) in 22,387 (49.4%) and the rapid test (RT) Dual Path Platform (DPP®)/ ELISA in 9,453 (20.8%). In the first two groups, the tests were performed using eluates from blood collected in the filter paper, and in the two last employed serum samples. RT-DPP®/ELISA demanded less time (days), from the test starting until the results release. In the of gross agreement rates, RT-DPP®/ ELISA showed the best performance (58.5%). Although the new protocol RT-DPP®/ELISA has contributed to decrease in the mismatch between ELISA and IFT results, ELISA confirms less than 60% of RT-DPP® reagent samples, indicating the need for searching the new alternatives for the canine diagnosis.

Análise comparativa entre os diferentes protocolos utilizados para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina / Comparative analysis among the different protocols used for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis

Foi realizada análise comparativa entre os diferentes protocolos utilizados no diagnóstico da leishmaniose visceral canina, em inquéritos soroepidemiológicos, na região de São José do Rio Preto, no período de 2008 a 2012. Para cada protocolo avaliou-se o total de exames processados, o tempo médio para examinar as amostras coletadas nos diferentes períodos e a análise de concordância bruta. Foram utilizados quatro protocolos: diagnóstico apenas pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) em 12.871 (28,4%) cães, por ensaio imunoenzimático (EIE) e RIFI em 632 (1,4%); 22.387 (49,4%) por EIE/RIFI, e 9.453 (20,8%) pelo teste rápido (TR) Dual Path Platform (DPP®)/EIE. Nos dois primeiros grupos, as análises foram no eluato de sangue coletado em papel de filtro, e nos dois últimos no soro sanguíneo. O protocolo TR-DPP®/EIE demandou menor tempo (dias) desde a execução até a liberação dos resultados, em comparação aos demais. Na avaliação das taxas de concordância bruta, o TR-DPP®/EIE apresentou melhor desempenho (58,5%). Apesar de, o atual protocolo TR-DPP®/EIE tenha contribuído para diminuir a discordância entre os resultados obtidos nos EIE/RIFI, o EIE confirma menos de 60% dos TR-DPP® reagentes, o que indica a necessidade de buscar novas alternativas para efetuar o diagnóstico em cães.

The comparative analysis was performed among the different protocols proposed for diagnosing the canine visceral leishmaniasis in the seroepidemiological surveys performed in the region of São José do Rio Preto, from 2008 to 2012. Each protocol evaluated the total number of processed tests, the mean time for examining the collected samples, in different periods, and the gross agreement analysis. Four protocols were used: diagnosis only by indirect immunofluorescence test (IFT), in 12,871 (28.4%) dogs samples; by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and IFT in 632 (1.4%); (ELISA/IFT) in 22,387 (49.4%) and the rapid test (RT) Dual Path Platform (DPP®)/ ELISA in 9,453 (20.8%). In the first two groups, the tests were performed using eluates from blood collected in the filter paper, and in the two last employed serum samples. RT-DPP®/ELISA demanded less time (days), from the test starting until the results release. In the of gross agreement rates, RT-DPP®/ELISA showed the best performance (58.5%). Although the new protocol RT-DPP®/ELISA has contributed to decrease in the mismatch between ELISA and IFT results, ELISA confirms less than 60% of RT-DPP® reagent samples, indicating the need for searching the new alternatives for the canine diagnosis.

Avaliação da efetividade do uso de coleiras impregnadas com deltametrina no controle da leishmaniose visceral no município de Votuporanga, Estado de São Paulo, Brasil, 2014 – 2016 / Evaluation of the effectiveness of using deltamethrinimpregnated collars to control visceral leishmaniasis in the municipality of Votuporanga, State of São Paulo, Brazil, 2014 – 2016

O objetivo deste artigo é apresentar os principais resultados do Projeto de Inovação Tecnológica em Saúde realizado entre 2014 e 2015, destacando-se o uso de coleiras impregnadas com deltametrina a 4% em cães em uma região endêmica para leishmaniose visceral (LV), o município de Votuporanga, São Paulo, Brasil. Neste município, anterior à realização do projeto, eram registrados muitos casos caninos e humanos da doença, com elevada taxa de letalidade. Durante o projeto, foram monitorados cerca de 16,5 mil cães, examinadas 25.700 amostras de sangue, considerando-se as perdas e as entradas de novos animais durante os quatro inquéritos sorológicos. Após sua finalização, verificou-se uma diminuição da prevalência e incidência de LV canina, assim como do número de casos humanos. A diminuição dos casos caninos foi correlacionada positivamente aos casos humanos no período de 2011 a 2016 (Correlação de Pearson de 0.914, p-valor<0.05). Além disso, a análise espacial dos resultados corrobora a diminuição ou desaparecimento da concentração de casos caninos e, consequentemente, de fontes e de infecção nas áreas endêmicas à medida que avançaram no tempo e espaço as diferentes etapas de desenvolvimento do projeto. Apesar da drástica redução na incidência da LV canina, ainda permaneceram algumas áreas críticas. Os resultados delineados sugerem a revisão de protocolos e manuais demonstrando a efetividade do uso das coleiras como medida preventiva e potencial no controle da LV.

This paper aims to present the main results of the Health Technology Innovation Project carried out between 2014 and 2015, which evaluates the use of 4% deltamethrin-impregnated collars in dogs, in an endemic region for visceral leishmaniasis (VL), the municipality of Votuporanga, São Paulo, Brazil. Before this project, Votuporanga had notified canine and human cases of the disease, with a high case fatality rate. We monitored approximately 16.5 thousand dogs, 25,700 blood samples analyzed, considering losses and entrances of new animals during the four serological surveys. After the project, the prevalence and incidence of canine VL decreased as well as the number of human cases. We found a positive correlation between the decrease of infected dogs and human cases from 2011 to 2016 (Pearson correlation of 0.914, p-value <0.05). Furthermore, the spatial analysis of the results indicated areas with canine cases concentration that decreased its intensity or disappeared concomitantly to the project levels in the space-time. Despite the drastic reduction in the incidence of canine VL, some critical areas remain. The current results suggest the review of protocols and manuals demonstrating the effectiveness of the use of collars as a preventive measure and potential in the control of VL.

Human visceral leishmaniasis and relationship with vector and canine control measures / Leishmaniose visceral em humanos e relação com medidas de controle vetorial e canino

ABSTRACT OBJECTIVE Estimate the coverage of control measures of visceral leishmaniasis and relate them with the occurrence of human visceral leishmaniasis in endemic urban area. METHODS Cases of human and canine visceral leishmaniasis were considered as study population and evaluated by a serological survey conducted in Araçatuba, state São Paulo, from 2007 to 2015. The cases of human visceral leishmaniasis were geocoded by the address of the patients and the canine disease by the address of the dogs' owners. The coverage of serological survey, euthanasia, and insecticide spraying was calculated, as well as the canine seroprevalence and the incidence rates of human visceral leishmaniasis. The relationship between human visceral leishmaniasis and control measures was evaluated, as well as the seroprevalence by comparing maps and by linear regression. The relationship between the canine and the human disease was also evaluated by the Ripley's K function. RESULTS The incidence rates of human visceral leishmaniasis showed a period of decline (2007 to 2009) and a period of stability (2010 to 2015), a behavior similar to that of canine seroprevalence. In general, the coverage of control measures was low, and the non-association with the incidence of human visceral leishmaniasis can be a result of the period analyzed and of the small number of analyzed units (sectors of the Superintendence for the Control of Endemic Diseases). The distribution of human cases showed spatial dependence with the distribution of seropositive dogs from 2007 to 2009. CONCLUSIONS This study reaffirmed the relationship between the occurrence of the disease in humans and dogs, it verified a decrease in the rates of visceral leishmaniasis in Araçatuba over time, even at low coverage of control activities. However, further studies are needed to determine if factors beyond monitoring and control measures are involved in the reduction of incidences.

RESUMO OBJETIVO Estimar a cobertura das atividades de controle da leishmaniose visceral e relacioná-las com a ocorrência de leishmaniose visceral em humanos em área urbana endêmica. MÉTODOS Foram considerados como população de estudo os casos de leishmaniose visceral em humanos e em cães avaliados por inquérito sorológico censitário realizado em Araçatuba, SP, de 2007 a 2015. Os casos de leishmaniose visceral em humanos foram geocodificados pelo endereço de residência dos pacientes e, os cães, pelo endereço de residências dos respectivos tutores. Foram calculadas as coberturas do inquérito sorológico, da eutanásia e de borrifação de inseticida, as soroprevalências caninas e as taxas de incidência de leishmaniose visceral em humanos. A relação entre a leishmaniose visceral em humanos e as medidas de controle, bem como a soroprevalência foram avaliadas por comparação de mapas e por meio de regressão linear. A relação entre a doença canina e a humana também foi avaliada por meio da função K de Ripley . RESULTADOS As taxas de incidência de leishmaniose visceral em humanos apresentaram um período de declínio (2007 a 2009) e um período de estabilidade (2010 a 2015), comportamento semelhante ao das soroprevalências caninas. Em geral, a cobertura das medidas de controle foi baixa e a não associação com a incidência de leishmaniose visceral em humanos pode ser consequência do período analisado e do número pequeno de unidades analisadas (setores da Superintendência de Controle de Endemias). A distribuição dos casos humanos apresentou dependência espacial com a distribuição dos cães soropositivos de 2007 a 2009. CONCLUSÕES Este trabalho reafirmou a relação entre a ocorrência da doença no homem e no cão, verificou a diminuição das taxas de leishmaniose visceral em humanos e em cães em Araçatuba ao longo do tempo, mesmo em baixa cobertura das atividades de controle. Entretanto, novos estudos são necessários para averiguar se fatores além das atividades de vigilância e controle estariam envolvidos na diminuição das incidências.

Estudos da fauna flebotomínica (Diptera: Psychodidae: Phlebotominae) e infecção natural por Leishmania infantum em municípios da região noroeste do estado de São Paulo, Brasil / Studies on the phlebotomine sandflies fauna (Diptera: Psychodidae: Phlebotominae) and on the natural infection by Leishmania infantum in municipalities of northwest region of the State of São Paulo

A expansão geográfica e o crescente aumento dos casos de leishmaniose visceral na região noroeste do estado de São Paulo despertaram o interesse em desenvolver estudo para identificar a fauna flebotomínica e avaliar sua infecção natural por Leishmania infantum nos municípios de Fernandópolis, Santa Fé do Sul e Votuporanga. Foram realizados inquéritos entomológicos com a utilização de armadilhas luminosas do tipo CDC, instaladas em diferentes ecótopos peridomiciliares, durante o período de agosto de 2013 a novembro de 2014. A detecção de DNA de L. infantum em flebotomíneos foi realizada por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Foram coletados 507 flebotomíneos, sendo 116 fêmeas (22,9 %) e 391 machos (77,1 %), representados por sete espécies, com predomínio de Lutzomyia longipalpis, com 461 exemplares (90,9 %). As análises moleculares revelaram DNA de L. infantum em um exemplar de L. longipalpis capturado em Fernandópolis. Estes resultados confirmam a presença desta espécie nos municípios pesquisados. E o encontro de pelo menos um exemplar, naturalmente infectado, em Fernandópolis evidencia a necessidade de realizar ações de controle direcionadas aos vetores neste município, com o intuito de conter sua dispersão e prevenir a ocorrência de casos humanos de leishmaniose visceral.

The geographical expansion and the increase of visceral leishmaniasis cases in northwest region ofthe São Paulo state aroused the interest of conducting a study to identify the phlebotomine sandfliesfauna, and to evaluate the rate of natural infection by Leishmania infantum in Fernandópolis, SantaFé do Sul and Votuporanga. Entomological surveys were conducted using the CDC miniature lighttraps, installed in different types of peridomestic ecotopes, during the period from August 2013 toNovember 2014. The L. infantum DNA detection in phlebotomine sandflies was performed by meansof conventional Polymerase Chain Reaction (PCR). Five hundred seven phlebotomine sandfliesspecimens were collected, being 116 females (22.9 %) and 391 males (77.1 %), which were representedby seven species, prevailing Lutzomyia longipalpis, with 461 specimens (90.9 %). Molecular analysisrevealed DNA of L. infantum in one specimen of L. longipalpis from Fernandópolis. These findingsconfirm the occurrence of this species in all of the surveyed municipalities. And the existence ofat least one specimen, naturally infected in Fernandópolis, highlights the need for performing thefurther control measures directed to the vectors in this municipality, for restraining their spread andto prevent the occurrence of human cases of visceral leishmaniasis.

Avaliação do exame imuno-histoquímico para o diagnóstico de Leishmania spp. em amostras de tecidos caninos / Evaluation of immunohistochemical technique for the diagnosis of Leishmania spp. in canine tissues samples

No Brasil, as leishmanioses representam um importante problema de saúde pública pela sua elevada incidência, ampla distribuição geográfica e marcante aumento na transmissão associados à urbanização da doença. Cães são considerados os principais reservatórios da leishmaniose visceral (LV) no ambiente urbano, tornando-se fundamental o aprimoramento do diagnóstico dadoença nessa espécie. Este estudo objetivou a avaliação da técnica de imuno-histoquímica (IHQ) para o diagnóstico de Leishmania spp. em amostras de diferentes tecidos de cães recebidas no Núcleo de Patologia Quantitativa do Instituto Adolfo Lutz (NPQ-IAL). Amostras de tecidos coletadas de 134 cães, provenientes de municípios do Estado de São Paulo, positivos para LV por teste rápido(TR DPP®-Bio-Manguinhos), ensaio imunoenzimático-EIE/Elisa (Bio-Manguinhos) e pela reação em cadeia de polimerase, foram submetidas a marcação IHQ específica, em duplicata. A reação de IHQ apresentou sensibilidade de 98,51 %, especificidade de 100,00 % e acurácia de 98,61 %. A maior positividade foi detectada nas amostras de baço. O índice Kappa foi de 0,84 entre os resultados da análise dos tecidos em duplicata. A técnica de IHQ pode ser utilizada como uma técnica rotineirapara o diagnóstico das leishmanioses caninas, sendo padronizada e implantada no NPQ-IAL.

In Brazil, leishmaniasis represents an important public health problem due to its high incidence, wide geographic distribution and marked increase in transmission associated to the urbanization of the disease. Dogs are considered the main reservoirs of visceral leishmaniasis (VL) in the urban environment, making it fundamental to improve the diagnosis of this species. This study aimed at the evaluation of the immunohistochemical technique (IHC) for the diagnosis of Leishmania spp. In samples of different dog tissues received at the Adolfo Lutz Institute's Quantitative Pathology Center (NPQ-IAL). Tissue specimens collected from 134 dogs, from municipalities in the State of São Paulo, positive for LV by rapid test (TR DPP®-Bio-Manguinhos), enzyme-linked immunosorbent assay (EIE / Elisa (Bio-Manguinhos) and the chain reaction of Polymerase, were subjected to specific IHQ labeling, in duplicate. The IHQ reaction showed sensitivity of 98.51%, specificity of 100.00% and accuracy of 98.61%. The highest positivity was detected in spleen samples. The Kappa index was 0.84 between the results of the tissue analysis in duplicate. The IHC technique can be used as a routine technique for the diagnosis of canine leishmaniasis, being standardized and implanted in the NPQ-IAL.

Evaluation of immunohistochemical technique for the diagnosis of Leishmania spp. in canine tissues samples / Avaliação do exame imuno-histoquímico para o diagnóstico de Leishmania spp. em amostras de tecidos caninos

In Brazil, leishmaniasis represents a major public health problem due to its high incidence, wide distribution and remarkable increase in transmission associated with the disease urbanization. Dogs are considered as the main reservoirs of visceral leishmaniasis (VL) in the urban environment and diagnosis improvement was fundamental in this species. This study aimed at evaluating the immunohistochemical technique (IHC) for diagnosing Leishmania spp. in differents tissues samples collected from dogs. This investigation was performed at the Quantitative Pathology Center of the Institute Adolfo Lutz (NPQ-IAL). Tissue samples collected from 134 dogs, derived from municipalities of São Paulo State, positive for VL by rapid testing (TR DPP® - Bio-Manguinhos), enzyme-linked immunosorbent assay (EIA/ELISA - Bio-Manguinhos), and polymerase chain reaction, were analyzed by specific IHC in duplicate. These dogs were previously diagnosed as VL. IHC showed sensitivity of 98.51 %, specificity of 100.00 %, positive predictive value of 100.00 %, negative predictive value of 83.33 % and accuracy of 98.61 %. The major positivity was detected in spleen samples. Kappa index between the tissues duplicate results was of 0.84. IHC technique, standardized and implemented at NPQ-IAL, showed to be suitable to be used as routine test for diagnosing canine leishmaniasis effectivelly.

No Brasil, as leishmanioses representam um importante problema de saúde pública pela sua elevada incidência, ampla distribuição geográfica e marcante aumento na transmissão associados à urbanização da doença. Cães são considerados os principais reservatórios da leishmaniose visceral (LV) no ambiente urbano, tornando-se fundamental o aprimoramento do diagnóstico da doença nessa espécie. Este estudo objetivou a avaliação da técnica de imuno-histoquímica (IHQ) para o diagnóstico de Leishmania spp. em amostras de diferentes tecidos de cães recebidas no Núcleo de Patologia Quantitativa do Instituto Adolfo Lutz (NPQ-IAL). Amostras de tecidos coletadas de 134 cães, provenientes de municípios do Estado de São Paulo, positivos para LV por teste rápido (TR DPP®-Bio-Manguinhos), ensaio imunoenzimático-EIE/Elisa (Bio-Manguinhos) e pela reação em cadeia de polimerase, foram submetidas a marcação IHQ específica, em duplicata. A reação de IHQ apresentou sensibilidade de 98,51 %, especificidade de 100,00 % e acurácia de 98,61 %. A maior positividade foi detectada nas amostras de baço. O índice Kappa foi de 0,84 entre os resultados da análise dos tecidos em duplicata. A técnica de IHQ pode ser utilizada como uma técnica rotineira para o diagnóstico das leishmanioses caninas, sendo padronizada e implantada no NPQ-IAL.

Freqüência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em mulheres, atendidas nas unidades da rede de saúde publica da região metropolitana de São Paulo (2001-2005) / Frequency of anti-Toxoplasma gondii antibodies in women attended at public health center network of São Paulo metropolitan region (2001-2005)

Toxoplasma gondii é um parasita intracelular obrigatório que pode infectar o homem e animais homeotérmicos. Nos indivíduos imunocompetentes a infecção é geralmente assintomática, os principais grupos atingidos gravemente pela doença são os indivíduos imunodeprimidos e as gestantes que adquirem a infecção durante a gestação. Neste trabalho foram analisadas 1485 amostras de soros de mulheres atendidas na rede pública de saúde da grande São Paulo, durante o período de janeiro de 2001 a julho de 2005. A detecção de anticorpos IgG anti-T.gondii foi realizada por meio de ensaio imunoenzimático(ELISA) e a técnica Imunofluorescência Indireta (IFAT) foi utilizada para detecção de anticorpos IgMe IgG anti- T.gondii. Das amostras analisadas 57,10% apresentaram anticorpos IgG anti-T.gondii, e 1,95% possuíam anticorpos específicos da classe IgM. Os inquéritos epidemiológicos realizados no Brasil demonstraram que a soroprevalência de anticorpos IgG anti-T. gondii varia de 40 a 80%, o que corroboram com os dados obtidos no presente estudo. Existe a necessidade de estudos que identifiquem as taxas de prevalência nas várias regiões brasileiras, com o intuito de implantar trabalhos de informação e conscientização da população para diminuição do risco de infecção congênita por T. gondii.

Observaçöes ecológicas de flebotomíneos em área endêmica de leishmaniose tegumentar americana (LTA) no município de Eldorado, Vale do Ribeira, Estado de Säo Paulo, Brasil, 1996-1997. I - Sazonalidade e frequência de L. ayrozai em diferentes ecótopos com animais sentinelas em ambiente florestado / Sandfly ecological observations in Eldorado County, Ribeira Valley, Säo Paulo State, Brazil, an endemic area of American Cutaneous Leishmaniasis. Period between 1996 and 1997. I - Sazonality and frequence of Lutzomyia ayrozai to different ecotopes with sentinels aninals in forest enviroment

Com o objetivo de avaliar a participaçäo de flebotomíneos e de animais domésticos, domiciliados e/ou silvestres na epidemiologia da leishmaniose tegumentar americana, foram realizadas observaçöes em área periurbana do município de Eldorado, Vale do Ribeira, Säo Paulo. No interior da mata, as capturas de flebotomíneos ocorreram no período de janeiro de 1996 a dezembro de 1997, com armadilha de Shannon e armadilhas luminosas, tipo Falcäo modificada e em ecótopos artificiais para manutençäo de galinhas, marsupiais, roedores silvestres, hamsters e cäes com papéis embebidos com vaselina líquida, além de um pano branco estendido na parede dos recintos. A fauna de flebotomíneos esteve representada pr 10 espécies e um total de 1.066 exemplares capturados. A presença de iscas animais näo interferiu na diversidade das espécies de flebotomíneos. L. ayrozai foi a espécie predominante nesse ambiente revelando maior atividade nos meses mais secos do ano, entre abril e julho. A presença marcante dessa espécie em ambiente florestal, confere-lhe condiçöes potenciais para o papel de vetor de Leishmania sp em seu ciclo silvestre na regiäo

Observations were made in periurban area in Eldorado county, Ribeira Valley, São Paulo State, Brazil for the purpose of assessing the participation of phlebotomines, domestic, domiciliar and wildanimals in the epidemiology of American Cutaneous Leishmaniasis. Several artificial ecotopes were installedwithin the forest for the capture of phlebotomines between January 1996 and December 1997. Ten sandflyspecies represented by 1,066 specimens were captured during this period. Lutzomyia ayrozai waspredominant in the forest.The greatest peak occurred from April to July. Lu.ayrozai could be an importantvector in enzootic cicle of Leishmania in this region

Manutençäo da fecundidade e oviposiçäo em triatoma infestans após décadas de criaçäo em condiçöes de laboratório / Maintenance of fecundity and oviposition in triatoma infestans after decades of breeding under laboratory conditions

O objetivo deste estudo foi avaliar a possibilidade da manutençäo da fecundidade e oviposiçäo em triatomíneos após décadas de criaçäo em condiçöes de laboratório. Foi observado o desempenho de 11 colônias de triatoma infestans do Laboratório de Triatomíneos do Instituto Adolfo Lutz. Os insetos foram mantidos em temperatura e umidade constantes (27-28 grau C e 70-80(por cento),respectivamente) e acasalados em diferentes proporçöes de machos e fêmeas. Dois ritmos de alimentaçäo foram utilizados. No primeiro, os triatomíneos foram alimentados semanalmente, e no segundo, o ritmo de alimentaçäo foi quinzenal ou a cada 21 dias. Durante o estudo marrecos foram utilizados como fonte de sangue. Os resultados confirmaram a importância do ritmo de alimentaçäo para o oviposiçäo. Insetos que receberam alimentaçäo semanal apresentaram os melhores índices de oviposiçäo, representados pelo número de ovos por fêmea por dia (ofd), entre 0.39 e 4.40 ofd, sendo mais frequente taxas acima de 1.30 ofd. Colônias que tiveram alimentaçäo quizenal ou a cada 21 dias apresentaram inexpressivos índices de oviposiçäo, entre 0.05 e 1.07 ofd, sendo mais frequente inferior a 0.30 ofd. Concluiu-se que após décadas de criaçäo em condiçöes de laboratório, é possível manter a fecundidade e a capacidade de oviposiçäo dentro dos padröes normais, em colônias de Triatoma infestans, se o ritmo de alimentaçäo dos adultos näo exceder 7 dias. O ritmo de alimentaçäo näo afetou o índice de sobrevivência dos adultos, mas foi crítico para a fecundidade e oviposiçäo. (AU)

The aim of this study was to evaluate the possibility of maintenance of fecundity and the capability of oviposition in Reduviid bugs after decades of breeding under laboratory conditions. It was observed the performance of eleven colonies of Triatoma infestans from the Laboratory of Triatomines of Adolfo Lutz Institute. Insects were mated in different ratio of males and females. Two rhythms of alimentation were used. In the first, triatomines were fed weekly, and in the second rhythm the meal were offered every fifteen or twenty one days. During all the study teals were used as blood source, and temperature and humidity were constant, at 27-28∞C and 70-80%, respectivelly. The results confirm the importance of the rhythm of alimentation for oviposition. Insects fed weekley showed the best rates of oviposition, it was represented by number of eggs by female per day (efd), between 0.39 to 4.40 efd, being more frequent up to 1.30 efd. Colonies that were fed every fifteen or twenty one days showed inexpressives rates of oviposition, between 0.05 to 1.07 efd, being more frequent below to 0.30efd. It was concluded that after decades of breeding under laboratory conditions it is possible to maintain the fecundity, into normal patterns, in the T. infestans if the rhythm of alimentation of adults donít exceed seven days. Rhythm of alimentation donít affected the survival rates of adults, but it was critical for the fecundity and oviposition. (AU)

Epidemiologia da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) no Estado de Säo Paulo: III. Influência da açäo antrópica na sucessäo vetorial da LTA / Epidemiology of American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) in the State of Säo Paulo, Brazil: III. Anthropic action influence in the vectorial succession of ACL

As alteraçöes ambientais e reduçöes na cobertura vegetal do Estado de Säo Paulo, ao longo do século XX, resultantes da açäo do próprio homem, determinaram diferentes perfis epidemiológicos para a LTA em terras paulistas. Ateraçöes significativas, também, foram verificadas na composiçäo da fauna flebotomínica. Lutzomyia intermedia s.l. tornou-se a espécie presente em maior densidade nas áreas endêmicas no final deste século. Nesta investigaçäo objetivou-se avaliar a importância da açäo antrópica na perpetuaçäo da LTA, hoje espalhada em todo o Estado de Säo Paulo. No município de Eldorado, Vale do Ribeira, foram definidos 3 ambientes para as coletas de flebotomíneos: i - interior de mata, ambiente näo modificado; ii - margem de mata, ambiente pouco modificado com a construçäo de um galinheiro experimental e iii - ambiente modificado pela açäo antrópica com habilitaçäo humana, animais domésticos e cultivo de banana. Os ambientes florestados e aquele com pequena alteraçäo revelaram maior diversidade de espécies de flebotomíneos, com predomínio de L. fischeri, L. ayrozai e L. migonei. No ambiente altamente alterado, L. intermedia s.l. constituiu a espécie predominante. A açäo antrópica sobre o ambiente exerceu pressäo decisiva na sucessäo biológica das espécies de flebotomíneos. (AU)

Different patterns in the Americana Cutaneous Leishmaniasis have been determinated in the XX th Century due to environmental modifications by anthropic action. Modifications have been occurred in the sandfly composition, too. Observations were made in rural and periurban areas in Eldorado county, Ribeira Valley, S"o Paulo State for the purpouse of evaluate the influence of anthropic action in the sandfly composition. The insects were caught around the house, at the edge and inside the forest, between October,1989 and September,1993. It was observed that the level of environmental modification produced considerable effect on the biological succession of the phlebotomine fauna, and suggested the difficulty that L. fischeri, L. migonei and L. ayrozai have in their attempt to overcome the barriers created by man. L. intermedia s.l. has adapted so well that is at present the only species which has successfully colonizated the anthropic environment in the Ribeira Valley. (AU)